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几种细胞固定方法  

2008-06-18 15:56:47|  分类: 细胞频道 |  标签: |举报 |字号 订阅

选择最佳固定液标准是:
(1)最好地保持细胞和组织的形态结构;
(2)最大限度地保存抗原的免疫活性。一些含重金属的固定液在免疫组化和细胞化学技术中是禁用的;
(3)不要用可能带有自发荧光的固定剂,如带有苦味酸的固定剂,还有甲醛升汞固定液,会使上皮细胞产生非特异性荧光;
(4)固定剂的选择、固定时间、温度和PH值都会影响实验结果。
单纯固定液
(1)4%中性甲醛固定液:最常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作(Job)。中性甲醛是以PH7.2-7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处,保存时间不超过一个月。
甲醛(40%) 100ml
无水磷酸氢二钠 6.5g
磷酸二氢钠 4.0g
蒸馏水 900ml
(2)乙醇固定液:使用时以80%-95%的浓度为宜,具有硬化、固定、脱水等作用,对组织渗透力较弱,因此很少单独使用,但其保存组织中的核酸强于中性甲醛,故常用于有核酸操作的实验或检查,假如用于证实尿酸结晶和保存糖原,可用于100%乙醇固定组织。
(3)4%多聚甲醛固定液:主要用于培养细胞的固定。
混合固定液
(1)乙醇-甲醛(乙醇-福尔马林,AF)固定液:适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用,固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。
甲醛(40%) 100ml
95%乙醇 900ml
(2)B5(醋酸钠-升汞-甲醛)固定液:多用于固定淋巴组织。染色前应进行脱汞沉淀处理。
无水醋酸钠 1.25g
升汞 6.0g
蒸馏水 90ml
使用前加入甲醛 10ml
(3)Bouin固定液:非凡适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀,收缩很少,不会使组织变硬变脆。需现配现用。
饱和苦味酸水溶液(约1.22%) 75ml
甲醛 25ml
冰醋酸 5ml
(4)Carnoy固定液:穿透能力强,可很好的固定细胞质和细胞核,非凡适用于固定外膜致密的组织,也适用于糖原及尼氏小体的固定。
无水乙醇 60ml
氯仿 30ml
冰醋酸 10ml
(5) Zenker固定液:经此液固定的标本,细胞核和细胞质染色颇为清楚,但成本较高且需非凡处理汞。该固定液要避免接触阳光,以免引起化学变化而失效。
升汞          5.0g
重铬酸钾        2.5g
硫酸钠        1.0g
蒸馏水(加至)    100ml
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